title: Biochemical and functional characterization of Bothropoidin: the first haemorrhagic metalloproteinase from Bothrops pauloensis snake venom.
abstract: We present the biochemical and functional characterization of Bothropoidin, the first haemorrhagic metalloproteinase isolated from Bothrops pauloensis snake venom. This protein was purified after three chromatographic steps on cation exchange CM-Sepharose fast flow, size-exclusion column Sephacryl S-300 and anion exchange Capto Q. Bothropoidin was homogeneous by SDS-PAGE under reducing and non-reducing conditions, and comprised a single chain of 49,558 Da according to MALDI TOF analysis. The protein presented an isoelectric point of 3.76, and the sequence of six fragments obtained by MS (MALDI TOF\TOF) showed a significant score when compared with other PIII Snake venom metalloproteinases (SVMPs). Bothropoidin showed proteolytic activity on azocasein, Aα-chain of fibrinogen, fibrin, collagen and fibronectin. The enzyme was stable at pH 6-9 and at lower temperatures when assayed on azocasein. Moreover, its activity was inhibited by EDTA, 1.10-phenanthroline and β-mercaptoethanol. Bothropoidin induced haemorrhage [minimum haemorrhagic dose (MHD) = 0.75 µg], inhibited platelet aggregation induced by collagen and ADP, and interfered with viability and cell adhesion when incubated with endothelial cells in a dose and time-dependent manner. Our results showed that Bothropoidin is a haemorrhagic metalloproteinase that can play an important role in the toxicity of B. pauloensis envenomation and might be used as a tool for studying the effects of SVMPs on haemostatic disorders and tumour metastasis.
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil mrochauesb@yahoo.com.b.
authors.forename: Mário Sérgio R
authors.initials: MS
authors.lastname: Gomes
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Dayane L
authors.initials: DL
authors.lastname: Naves de Souza
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Denise O
authors.initials: DO
authors.lastname: Guimarães
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Daiana S
authors.initials: DS
authors.lastname: Lopes
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Carla C N
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authors.lastname: Mamede
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Sarah Natalie C
authors.initials: SN
authors.lastname: Gimenes
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: David C
authors.initials: DC
authors.lastname: Achê
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Renata S
authors.initials: RS
authors.lastname: Rodrigues
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Kelly A G
authors.initials: KA
authors.lastname: Yoneyama
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Márcia H
authors.initials: MH
authors.lastname: Borges
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil.
authors.forename: Fábio
authors.initials: F
authors.lastname: de Oliveira
authors.affiliation: Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia, UFU, Uberlândia-MG, Brazil, Departamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), BA, Brazil, INCT, Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica, Belo Horizonte-MG, Brazil, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade Federal de Uberlândia (UFU), Uberlândia-MG, Brazil, Fundação Ezequiel Dias, FUNED, Belo Horizonte-MG, Brazil veridiana@ingeb.ufu.br.
authors.forename: Veridiana M
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