High-resolution hepatitis C virus subtyping using NS5B deep sequencing and phylogeny, an alternative to current methods.
Hepatitis C virus (HCV) is classified into seven major genotypes and 67 subtypes. Recent studies have shown that in HCV genotype 1-infected patients, response rates to regimens containing direct-acting antivirals (DAAs) are subtype dependent. Currently available genotyping methods have limited subtyping accuracy. We have evaluated the performance of a deep-sequencing-based HCV subtyping assay, developed for the 454/GS-Junior platform, in comparison with those of two commercial assays (Versant HCV genotype 2.0 and Abbott Real-time HCV Genotype II) and using direct NS5B sequencing as a gold standard (direct sequencing), in 114 clinical specimens previously tested by first-generation hybridization assay (82 genotype 1 and 32 with uninterpretable results). Phylogenetic analysis of deep-sequencing reads matched subtype 1 calling by population Sanger sequencing (69% 1b, 31% 1a) in 81 specimens and identified a mixed-subtype infection (1b/3a/1a) in one sample. Similarly, among the 32 previously indeterminate specimens, identical genotype and subtype results were obtained by direct and deep sequencing in all but four samples with dual infection. In contrast, both Versant HCV Genotype 2.0 and Abbott Real-time HCV Genotype II failed subtype 1 calling in 13 (16%) samples each and were unable to identify the HCV genotype and/or subtype in more than half of the non-genotype 1 samples. We concluded that deep sequencing is more efficient for HCV subtyping than currently available methods and allows qualitative identification of mixed infections and may be more helpful with respect to informing treatment strategies with new DAA-containing regimens across all HCV subtypes.
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain josep.quer@vhir.org jignacio.esteban@ciberehd.org.
Josep
J
Quer
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Roche Diagnostics SL, Barcelona, Spain.
Josep
J
Gregori
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Francisco
F
Rodríguez-Frias
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain.
Maria
M
Buti
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Liver Unit, Hospital La Paz-Carlos III, Madrid, Spain.
Antonio
A
Madejon
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Liver Unit, Hospital Clinic, IDIBAPS, Barcelona, Spain.
Sofia
S
Perez-del-Pulgar
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain.
Damir
D
Garcia-Cehic
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Rosario
R
Casillas
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Maria
M
Blasi
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Maria
M
Homs
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
David
D
Tabernero
Roche Diagnostics SL, Barcelona, Spain.
Miguel
M
Alvarez-Tejado
Roche Diagnostics SL, Barcelona, Spain.
Jose Manuel
JM
Muñoz
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain.
Maria
M
Cubero
Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Andrea
A
Caballero
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital Universitario Virgen de Valme, Seville, Spain.
Jose Antonio
JA
del Campo
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Centro de Biología Molecular Severo Ochoa-Universidad Autónoma de Madrid (CSIC-UAM), Campus de Cantoblanco, Madrid, Spain.
Esteban
E
Domingo
Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Irene
I
Belmonte
Biochemistry Unit, Virology Unit /Microbiology Department, HUVH, Barcelona, Spain.
Leonardo
L
Nieto
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Liver Unit, Hospital Clinic, IDIBAPS, Barcelona, Spain.
Sabela
S
Lens
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital San Cecilio, Granada, Spain.
Paloma
P
Muñoz-de-Rueda
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital de la Princesa, Madrid, Spain.
Paloma
P
Sanz-Cameno
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Banc de Sang i de Teixits, Institut Català de la Salut, Barcelona, Spain.
Silvia
S
Sauleda
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Banc de Sang i de Teixits, Institut Català de la Salut, Barcelona, Spain.
Marta
M
Bes
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain CSIC, Instituto de Parasitología y Biomedicina López Neyra, Granada, Spain.
Jordi
J
Gomez
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Centro de Astrobiología (CSIC-INTA), Madrid, Spain.
Carlos
C
Briones
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Centro de Biología Molecular Severo Ochoa-Universidad Autónoma de Madrid (CSIC-UAM), Campus de Cantoblanco, Madrid, Spain.
Celia
C
Perales
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Centro de Biología Molecular Severo Ochoa-Universidad Autónoma de Madrid (CSIC-UAM), Campus de Cantoblanco, Madrid, Spain.
Julie
J
Sheldon
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain.
Lluis
L
Castells
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain.
Lluis
L
Viladomiu
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital San Cecilio, Granada, Spain.
Javier
J
Salmeron
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital San Cecilio, Granada, Spain.
Angela
A
Ruiz-Extremera
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital San Cecilio, Granada, Spain.
Rosa
R
Quiles-Pérez
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital de la Princesa, Madrid, Spain.
Ricardo
R
Moreno-Otero
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital de la Princesa, Madrid, Spain.
Rosario
R
López-Rodríguez
Pathological Anatomy Department, VHIR-HUVH, Barcelona, Spain.
Helena
H
Allende
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Hospital Universitario Virgen de Valme, Seville, Spain.
Manuel
M
Romero-Gómez
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain.
Jaume
J
Guardia
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain.
Rafael
R
Esteban
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Liver Unit, Hospital La Paz-Carlos III, Madrid, Spain.
Javier
J
Garcia-Samaniego
Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Liver Unit, Hospital Clinic, IDIBAPS, Barcelona, Spain.
Xavier
X
Forns
Liver Unit, Internal Medicine, Lab. Malalties Hepàtiques, Vall d'Hebron Institut Recerca-Hospital Universitari Vall d'Hebron (VHIR-HUVH), Barcelona, Spain Centro de Investigación Biomédica en Red (CIBER) de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) del Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spain Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, Spain josep.quer@vhir.org jignacio.esteban@ciberehd.org.
Juan Ignacio
JI
Esteban
D005838:Genotype; D060005:Genotyping Techniques; D016174:Hepacivirus / Q000145:classification* / Q000235:genetics*; D006526:Hepatitis C / Q000175:diagnosis / Q000821:virology*; D059014:High-Throughput Nucleotide Sequencing; D006801:Humans; D010802:Phylogeny; D011933:Reagent Kits, Diagnostic; D017361:Viral Nonstructural Proteins / Q000235:genetics*; D012324:RNA-Dependent RNA Polymerase
D011933:Reagent Kits, Diagnostic; D017361:Viral Nonstructural Proteins; C087036:NS-5 protein, hepatitis C virus; D012324:RNA-Dependent RNA Polymerase