title: Analytical and Fluorimetric Methods for the Characterization of the Transmembrane Transport of Specialized Metabolites in Plants.
abstract: The characterization of membrane transport of specialized metabolites is essential to understand their metabolic fluxes and to implement metabolic engineering strategies towards the production of increased levels of these valuable metabolites. Here, we describe a set of procedures to isolate tonoplast membranes, to check their purity and functionality, and to characterize their transport properties. Transport is assayed directly by HPLC analysis and quantification of the metabolites actively accumulated in the vesicles, and indirectly using the pH sensitive fluorescent probe ACMA (9-amino-6- chloro-2-methoxyacridine), when a proton antiport is involved.
authors: Instituto de Investigação e Inovação em Saúde, Universidade do Porto, Porto, Portugal.|IBMC - Instituto de Biologia Molecular e Celular, Universidade do Porto, Rua do Campo Alegre, 823, 4150-180, Porto, Portugal.|Departamento de Biologia, Faculdade de Ciências, Universidade do Porto, Rua do Campo Alegre s/n, 4169-007, Porto, Portugal.
authors: Inês
authors: I
authors: Carqueijeiro
authors: Instituto de Investigação e Inovação em Saúde, Universidade do Porto, Porto, Portugal.|IBMC - Instituto de Biologia Molecular e Celular, Universidade do Porto, Rua do Campo Alegre, 823, 4150-180, Porto, Portugal.|Centro de Investigação e de Tecnologias Agro-Ambientais e Biológicas (CITAB-UM), Braga, Portugal.|Grupo de Investigação em Biologia Vegetal Aplicada e Inovação Agroalimentar, Departamento de Biologia, Universidade do Minho, Campus de Gualtar, 4710-057, Braga, Portugal.
authors: Viviana
authors: V
authors: Martins
authors: Centro de Investigação e de Tecnologias Agro-Ambientais e Biológicas (CITAB-UM), Braga, Portugal.|Grupo de Investigação em Biologia Vegetal Aplicada e Inovação Agroalimentar, Departamento de Biologia, Universidade do Minho, Campus de Gualtar, 4710-057, Braga, Portugal.
authors: Henrique
authors: H
authors: Noronha
authors: Centro de Investigação e de Tecnologias Agro-Ambientais e Biológicas (CITAB-UM), Braga, Portugal.|Grupo de Investigação em Biologia Vegetal Aplicada e Inovação Agroalimentar, Departamento de Biologia, Universidade do Minho, Campus de Gualtar, 4710-057, Braga, Portugal.
authors: Hernâni
authors: H
authors: Gerós
authors: Instituto de Investigação e Inovação em Saúde, Universidade do Porto, Porto, Portugal. msottoma@ibmc.up.pt.|IBMC - Instituto de Biologia Molecular e Celular, Universidade do Porto, Rua do Campo Alegre, 823, 4150-180, Porto, Portugal. msottoma@ibmc.up.pt.|Departamento de Biologia, Faculdade de Ciências, Universidade do Porto, Rua do Campo Alegre s/n, 4169-007, Porto, Portugal. msottoma@ibmc.up.pt.
authors: Mariana
authors: M
authors: Sottomayor
mesh_terms: D001692:Biological Transport; D002462:Cell Membrane / Q000378:metabolism*; D002851:Chromatography, High Pressure Liquid; D005470:Fluorometry / Q000379:methods*; D017136:Ion Transport; D055432:Metabolomics / Q000379:methods*; D010944:Plants / Q000378:metabolism*; D017494:Proton Pumps; D011522:Protons; D022161:Transport Vesicles
chemical_list: D017494:Proton Pumps; D011522:Protons
keywords: ABC transporters; ACMA; Alkaloids; BY-2 cells; Catharanthus roseus; H+-antiport; MATE transporters; Tobacco; Tonoplast vesicles; Transmembrane pH gradient; Transmembrane transport; Uptake assay