Probing the solution structure of Factor H using hydroxyl radical protein footprinting and cross-linking.
The control protein Factor H (FH) is a crucial regulator of the innate immune complement system, where it is active on host cell membranes and in the fluid phase. Mutations impairing the binding capacity of FH lead to severe autoimmune diseases. Here, we studied the solution structure of full-length FH, in its free state and bound to the C3b complement protein. To do so, we used two powerful techniques, hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) and chemical cross-linking coupled with mass spectrometry (MS), to probe the structural rearrangements and to identify protein interfaces. The footprint of C3b on the FH surface matches existing crystal structures of C3b complexed with the N- and C-terminal fragments of FH. In addition, we revealed the position of the central portion of FH in the protein complex. Moreover, cross-linking studies confirmed the involvement of the C-terminus in the dimerization of FH.
CNRS, UMR8587, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France Université Evry-Val-d'Essonne, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France.
Anna
A
Baud
CNRS, UMR8587, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France Université Evry-Val-d'Essonne, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France.
Florence
F
Gonnet
CNRS, UMR8587, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France Université Evry-Val-d'Essonne, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France.
Isabelle
I
Salard
CNRS, UMR8587, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France Université Evry-Val-d'Essonne, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France.
Maxime
M
Le Mignon
Synchrotron Soleil, BP 48, 91192 Gif-sur-Yvette Cedex, France.
Alexandre
A
Giuliani
Synchrotron Soleil, BP 48, 91192 Gif-sur-Yvette Cedex, France.
Pascal
P
Mercère
CNRS, UMR 8113, LBPA, ENS Cachan, Cachan 94235, France.
Bianca
B
Sclavi
CNRS, UMR8587, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France Université Evry-Val-d'Essonne, Laboratoire Analyse et Modélisation pour la Biologie et l'Environnement, 91025 Evry, France regis.daniel@univ-evry.fr.
Régis
R
Daniel
D017242:Complement Factor H / Q000737:chemistry* / Q000378:metabolism*; D006801:Humans; D017665:Hydroxyl Radical / Q000737:chemistry*; D011485:Protein Binding; D023302:Protein Footprinting / Q000379:methods*; D055503:Protein Multimerization; D017434:Protein Structure, Tertiary
D017665:Hydroxyl Radical; D017242:Complement Factor H
C3b protein; Factor H; complement system; cross-linking; hydroxyl radical protein footprinting; mass spectrometry