Analysis of Yeast Extracellular Vesicles.
Extracellular vesicles (EV) are important carriers of biologically active components in a number of organisms, including fungal cells. Experimental characterization of fungal EVs suggested that these membranous compartments are likely involved in the regulation of several biological events. In fungal pathogens, these events include mechanisms of disease progression and/or control, suggesting potential targets for therapeutic intervention or disease prophylaxis. In this manuscript we describe methods that have been used in the last 10 years for the characterization of EVs produced by yeast forms of several fungal species. Experimental approaches detailed in this chapter include ultracentrifugation methods for EV fractionation, chromatographic approaches for analysis of EV lipids, microscopy techniques for analysis of both intracellular and extracellular vesicular compartments, interaction of EVs with host cells, and physical chemical analysis of EVs by dynamic light scattering.
Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde (CDTS) Fundação Oswaldo Cruz, Avenida Brasil, 4036, Sala 814, Rio de Janeiro, RJ, Brazil. marciolr@cdts.fiocruz.br.|Instituto de Microbiologia Professor Paulo de Góes, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazil. marciolr@cdts.fiocruz.br.
Marcio L
ML
Rodrigues
Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde (CDTS) Fundação Oswaldo Cruz, Avenida Brasil, 4036, Sala 814, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Debora L
DL
Oliveira
Instituto de Microbiologia Professor Paulo de Góes, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Gabriele
G
Vargas
Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.|Laboratório de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho and Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Biologia Estrutural e Bioimagem, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Wendell
W
Girard-Dias
Laboratório de Tecnologia em Cultura de Células, Centro Universitário Estadual da Zona Oeste, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Anderson J
AJ
Franzen
Laboratório de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho and Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Biologia Estrutural e Bioimagem, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.|Laboratório de Biologia Estrutural, Diretoria de Programas, Instituto Nacional de Metrologia, Normalização e Qualidade Industrial (INMETRO), Xerém, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Susana
S
Frasés
Laboratório de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer, Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho and Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Biologia Estrutural e Bioimagem, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Kildare
K
Miranda
Instituto de Microbiologia Professor Paulo de Góes, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Leonardo
L
Nimrichter
D000818:Animals; D002458:Cell Fractionation; D002460:Cell Line; D000067128:Extracellular Vesicles / Q000378:metabolism* / Q000648:ultrastructure; D005656:Fungal Proteins / Q000378:metabolism; D050356:Lipid Metabolism; D051379:Mice; D022142:Secretory Vesicles / Q000378:metabolism; D022161:Transport Vesicles / Q000378:metabolism; D015003:Yeasts / Q000378:metabolism*
D005656:Fungal Proteins
Candida; Cryptococcus; Extracellular vesicles; Fungi; Saccharomyces; Yeast