title: Flow Cytometry Sorting to Separate Viable Giant Viruses from Amoeba Co-culture Supernatants.
abstract: Flow cytometry has contributed to virology but has faced many drawbacks concerning detection limits, due to the small size of viral particles. Nonetheless, giant viruses changed many concepts in the world of viruses, as a result of their size and hence opened up the possibility of using flow cytometry to study them. Recently, we developed a high throughput isolation of viruses using flow cytometry and protozoa co-culture. Consequently, isolating a viral mixture in the same sample became more common. Nevertheless, when one virus multiplies faster than others in the mixture, it is impossible to obtain a pure culture of the minority population. Here, we describe a robust sorting system, which can separate viable giant virus mixtures from supernatants. We tested three flow cytometry sorters by sorting artificial mixtures. Purity control was assessed by electron microscopy and molecular biology. As proof of concept, we applied the sorting system to a co-culture supernatant taken from a sample containing a viral mixture that we couldn't separate using end point dilution. In addition to isolating the quick-growingMimivirus, we sorted and re-cultured a new, slow-growing virus, which we named "Cedratvirus." The sorting assay presented in this paper is a powerful and versatile tool for separating viral populations from amoeba co-cultures and adding value to the new field of flow virometry.
authors.affiliation: Unité de Recherche sur les Maladies Infectieuses et Tropicales Emergentes, UM63 Centre national de la Recherche Scientifique 7278 IRD 198 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1095, Facultés de Médecine et de PharmacieMarseille, France; Institut Hospitalo-Universitaire Méditerranée Infection, Pôle des Maladies Infectieuses et Tropicales Clinique et Biologique, Fédération de Bactériologie-Hygiène-Virologie, Centre Hospitalo-Universitaire Timone, Assistance Publique-Hôpitaux de MarseilleMarseille, France.
authors.forename: Jacques Y B
authors.initials: JY
authors.lastname: Khalil
authors.affiliation: Becton Dickinson (Life Sciences-Biosciences) 94523 Rungis Cedex, France.
authors.forename: Thierry
authors.initials: T
authors.lastname: Langlois
authors.affiliation: Unité de Recherche sur les Maladies Infectieuses et Tropicales Emergentes, UM63 Centre national de la Recherche Scientifique 7278 IRD 198 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1095, Facultés de Médecine et de PharmacieMarseille, France; Institut Hospitalo-Universitaire Méditerranée Infection, Pôle des Maladies Infectieuses et Tropicales Clinique et Biologique, Fédération de Bactériologie-Hygiène-Virologie, Centre Hospitalo-Universitaire Timone, Assistance Publique-Hôpitaux de MarseilleMarseille, France.
authors.forename: Julien
authors.initials: J
authors.lastname: Andreani
authors.affiliation: Becton Dickinson (Life Sciences-Biosciences) 94523 Rungis Cedex, France.
authors.forename: Jean-Marc
authors.initials: JM
authors.lastname: Sorraing
authors.affiliation: Unité de Recherche sur les Maladies Infectieuses et Tropicales Emergentes, UM63 Centre national de la Recherche Scientifique 7278 IRD 198 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1095, Facultés de Médecine et de PharmacieMarseille, France; Institut Hospitalo-Universitaire Méditerranée Infection, Pôle des Maladies Infectieuses et Tropicales Clinique et Biologique, Fédération de Bactériologie-Hygiène-Virologie, Centre Hospitalo-Universitaire Timone, Assistance Publique-Hôpitaux de MarseilleMarseille, France.
authors.forename: Didier
authors.initials: D
authors.lastname: Raoult
authors.affiliation: Unité de Recherche sur les Maladies Infectieuses et Tropicales Emergentes, UM63 Centre national de la Recherche Scientifique 7278 IRD 198 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1095, Facultés de Médecine et de PharmacieMarseille, France; Institut Hospitalo-Universitaire Méditerranée Infection, Pôle des Maladies Infectieuses et Tropicales Clinique et Biologique, Fédération de Bactériologie-Hygiène-Virologie, Centre Hospitalo-Universitaire Timone, Assistance Publique-Hôpitaux de MarseilleMarseille, France.
authors.forename: Laurence
authors.initials: L
authors.lastname: Camoin
authors.affiliation: Unité de Recherche sur les Maladies Infectieuses et Tropicales Emergentes, UM63 Centre national de la Recherche Scientifique 7278 IRD 198 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1095, Facultés de Médecine et de PharmacieMarseille, France; Institut Hospitalo-Universitaire Méditerranée Infection, Pôle des Maladies Infectieuses et Tropicales Clinique et Biologique, Fédération de Bactériologie-Hygiène-Virologie, Centre Hospitalo-Universitaire Timone, Assistance Publique-Hôpitaux de MarseilleMarseille, France.
authors.forename: Bernard
authors.initials: B
authors.lastname: La Scola
mesh_terms: D000656:Amoeba / Q000821:virology*; D018920:Coculture Techniques; D005434:Flow Cytometry / Q000379:methods*; D000072139:Giant Viruses / Q000302:isolation & purification*; D057166:High-Throughput Screening Assays; D014773:Virology / Q000379:methods*
keywords: amoeba co-culture; flow cytometry; giant viruses; sorting; viral mixture