title: Dynamic regulation of extracellular ATP inEscherichia coli.
abstract: We studied the kinetics of extracellular ATP (ATPe) inEscherichia coliand their outer membrane vesicles (OMVs) stimulated with amphipatic peptides melittin (MEL) and mastoparan 7 (MST7). Real-time luminometry was used to measure ATPe kinetics, ATP release, and ATPase activity. The latter was also determined by following [32P]Pi released from [γ-32P]ATP.E. coliwas studied alone, co-incubated with Caco-2 cells, or in rat jejunum segments. InE. coli, the addition of [γ-32P]ATP led to the uptake and subsequent hydrolysis of ATPe. Exposure to peptides caused an acute 3-fold (MST7) and 7-fold (MEL) increase in [ATPe]. In OMVs, ATPase activity increased linearly with [ATPe] (0.1-1 µM). Exposure to MST7 and MEL enhanced ATP release by 3-7 fold, with similar kinetics to that of bacteria. In Caco-2 cells, the addition of ATP to the apical domain led to a steep [ATPe] increase to a maximum, with subsequent ATPase activity. The addition of bacterial suspensions led to a 6-7 fold increase in [ATPe], followed by an acute decrease. In perfused jejunum segments, exposure toE. coliincreased luminal ATP 2 fold. ATPe regulation ofE. colidepends on the balance between ATPase activity and ATP release. This balance can be altered by OMVs, which display their own capacity to regulate ATPe.E. colican activate ATP release from Caco-2 cells and intestinal segments, a response whichin vivomight lead to intestinal release of ATP from the gut lumen.
authors.affiliation: Universidad de Buenos Aires. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química y Fisico-Química Biológicas (IQUIFIB) "Prof. Alejandro C. Paladini". Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina.
authors.forename: Cora Lilia
authors.initials: CL
authors.lastname: Alvarez
authors.affiliation: Universidad de Buenos Aires. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química y Fisico-Química Biológicas (IQUIFIB) "Prof. Alejandro C. Paladini". Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina.|Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica. Cátedra de Química Biológica Superior. Buenos Aires, Argentina.
authors.forename: Gerardo
authors.initials: G
authors.lastname: Corradi
authors.affiliation: Universidad de Buenos Aires. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química y Fisico-Química Biológicas (IQUIFIB) "Prof. Alejandro C. Paladini". Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina.
authors.forename: Natalia
authors.initials: N
authors.lastname: Lauri
authors.affiliation: UMR-S1134, Integrated Biology of Red Blood Cells, Inserm, Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Institut National de la Transfusion Sanguine, Laboratoire d'Excellence GR-Ex, F-75015. Paris, France.
authors.forename: Irene
authors.initials: I
authors.lastname: Marginedas-Freixa
authors.affiliation: Universidad de Buenos Aires. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química y Fisico-Química Biológicas (IQUIFIB) "Prof. Alejandro C. Paladini". Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina.|Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Analítica y Fisicoquímica. Cátedra de Química Analítica. Buenos Aires, Argentina.
authors.forename: María Florencia
authors.initials: MF
authors.lastname: Leal Denis
authors.affiliation: Universidad Nacional de la Plata. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos (IIFP). Facultad de Ciencias Exactas. La Plata, Argentina.|Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Fisiología. La Plata, Argentina.
authors.forename: Nicolás
authors.initials: N
authors.lastname: Enrique
authors.affiliation: Universidad Nacional de La Plata. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata (INIBIOLP) "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Facultad de Ciencias Médicas. La Plata, Argentina.|Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Médicas. La Plata, Argentina.
authors.forename: Sabina María
authors.initials: SM
authors.lastname: Mate
authors.affiliation: Universidad Nacional de la Plata. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos (IIFP). Facultad de Ciencias Exactas. La Plata, Argentina.|Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Fisiología. La Plata, Argentina.
authors.forename: Verónica
authors.initials: V
authors.lastname: Milesi
authors.affiliation: UMR-S1134, Integrated Biology of Red Blood Cells, Inserm, Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Institut National de la Transfusion Sanguine, Laboratoire d'Excellence GR-Ex, F-75015. Paris, France.
authors.forename: Mariano Anibal
authors.initials: MA
authors.lastname: Ostuni
authors.affiliation: Universidad Nacional de La Plata. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata (INIBIOLP) "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Facultad de Ciencias Médicas. La Plata, Argentina.|Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Médicas. La Plata, Argentina.
authors.forename: Vanesa
authors.initials: V
authors.lastname: Herlax
authors.affiliation: Universidad de Buenos Aires. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química y Fisico-Química Biológicas (IQUIFIB) "Prof. Alejandro C. Paladini". Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina pjs@qb.ffyb.uba.ar.|Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica. Cátedra de Química Biológica Superior. Buenos Aires, Argentina.
authors.forename: Pablo Julio
authors.initials: PJ
authors.lastname: Schwarzbaum
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